Методика искусственного осеменения

Лабораторная подготовка к искусственному осеменению.

  1. Протереть стол, вымыть руки с мылом
  2. Снять чехол с микроскопа, протереть и подготовить микроскоп к работе, отрегулировать освещение, подключить обогревательный столик и положить на него покровные и предметные стекла
  3. Приготовить водяную баню с температурой +38 градусов Цельсия и опустить в нее термометр.
  4. На чистый стол поставить тампонницу с тампонами, пропитанными 70% спиртом. Справа на стол положить перчатки, канцелярские скрепки, пипетки, ампулы, салфетки и другие необходимые инструменты согласно технологии.
  5. Достать пинцетом:
  • первый тампон, обработать пальцы рук от кончиков пальцев к ладони и рабочую часть стола, тампон выбросить;
  • вторым - подставку под инструменты, поставить на обработанную часть стола, тампон выбросить;
  • третьим – все инструменты (от кончиков к держателю), разместить на подставке, тампон выбросить;
  • четвертым – кончик пакета (с зоошприцами или с чехлами), тампон выбросить.

При работе с «соломинками»: угол пакета с чехлами надрезать стерильными ножницами и выдвинуть чехол на 1/3 длины, либо чехол извлечь и разместить на подставке.

При работе с «облицованными гранулами»: вскрыть пакет с одноразовыми инструментами, собрать зоошприц и поместить на подставку, угол пакета зажать канцелярской скрепкой.

Оттаивание семени в соломинках.

Открыть сосуд Дьюара, охладить бранши стерильного пинцета (корнцанга) в жидком азоте и подтянуть канистру с семенем к верхней трети горловины сосуда Дьюара, быстро (не более 5 сек) извлечь одну соломинку, стряхнуть остатки азота и быстро погрузить ее в термостат для оттаивания. Перепады температуры во время извлечения замороженной спермы снижают ее качество. Канистру с семенем опустить в азот. Сосуд закрыть крышкой.

Медленно перемещать погруженную в воду (38 градусов Цельсия) соломинку, держа ее малым пинцетом. Оттаивание проводить в течение 10 секунд.

Достать соломинку из воды, осушить ее стерильной марлевой салфеткой. Проверить, чтобы воздушный пузырек находился у края соломинки, в случае смещения пузырька соломинку встряхнуть. При необходимости трением прогреть шприц, поршень инструмента для осеменения оттянуть 9-12 см и в трубку до упора вставить соломинку с семенем.

Конец соломинки со стороны запайки обрезать в середине воздушного пузырька стерильными ножницами строго перпендикулярно. Ножницы должны быть острыми, так как тупые ножницы деформируют соломинку, при этом может нарушиться плотность соединения ее с внутренней частью конусного конца защитного чехла. На шприц с соломинкой надеть защитный чехол, который закрепляют навинчиванием. Надежность закрепления проверить слабым надавливанием большого пальца руки на поршень шприца: чехол не должен сдвигаться. При этом удаляется воздушный пузырек и появляется капелька спермы, которую исследуют под микроскопом на подвижность.

Закрепить зажимом (канцелярской скрепкой) надрезанный край пакета с чехлами.

Оттаивание спермы в облицованных гранулах.

Открыть сосуд Дьюара, быстро охладить бранши стерильного пинцета (корнцанга) в жидком азоте и подтянуть канистру с семенем к верхней трети горловины сосуда Дьюара. Быстро (не более 5 сек) извлечь стерильным, предварительно охлажденным в азоте пинцетом, одну облицованную гранулу, погрузить ее в термостат (водяную баню) для оттаивания при температуре +38 градусов Цельсия. Перепады температуры во время извлечения замороженной спермы снижают ее качество. Канистру с семенем опустить в азот. Сосуд закрыть крышкой

Оттаивание проводить в течение 8-10 секунд.

Достать гранулу из воды, осушить ее стерильной марлевой салфеткой (не использовать ватные диски) и проверить на герметичность путем легкого сжатия между двумя пальцами рук. Негерметичные гранулы не использовать.

Подготовленную гранулу заправить в инструмент для искусственного осеменения. Проколоть облицованную гранулу стерильной иглой.

С момента оттаивания до введения спермы в половые органы животного должно пройти не более 15 минут.

Оценка активности семени

Оценка качества спермы проводится под микроскопом на обогревательном столике при температуре +38 градусов Цельсия:

- нанести на подогретое предметное стекло из инструмента для осеменения небольшую каплю семени. Накрыть сверху подогретым покровным стеклом.

Определит подвижность сперматозоидов при увеличении микроскопа в 120 – 180 раз.

Основным критерием, по которому оценивают качество спермы на пункте искусственного осеменения, является активное прямолинейно – поступательное движение (ППД) сперматозоидов. При оценке качества необходимо обращать внимание на наличие сперматозоидов с манежным движением (по кругу), с колебательными движениями (сперматозоид изгибается без продвижения вперед) и на агглютинацию (склеивание) сперматозоидов. Высшую оценку (10 баллов) получает сперма, в которой практически все сперматозоиды (100 %) имеют прямолинейно-поступательное движение. При оценке 4 балла 4 сперматозоида из 10 (т. е. 40 %) имеют ППД. Другие виды движения сперматозоидов (манежное, колебательное) при оценке спермы по бальной системе не учитываются.

Использовать для осеменения семя с оценкой не менее 4 баллов, то есть 4 из 10 сперматозоидов должны иметь прямолинейно-поступательное движение.

Для особо ценных быков и быков мясных пород допускается использование спермы с оценкой 3 балла.

При работе с оттаянной спермой следует помнить, что на жизнеспособность сперматозоидов влияют свет, температура, вода, спирт.

Перед выходом во двор для осеменения животного на осеменительный инструмент с оцененной спермой надеть «санитарную рубашку» или стерильную одноразовую перчатку 

Техника осеменения.

Перед искусственным осеменением коров и телок от фекальных масс освобождается прямая кишка, тщательно обмываются теплой водой корень хвоста и наружные половые органы, затем орошаются теплым раствором фурацилина и насухо вытираются бумажными полотенцами.   

Ректоцервикальный способ.

Суть ректоцервикального способа заключается в том, что сперма с помощью осеменительных инструментов вводится в шейку матки через влагалище, а шейка матки фиксируется через прямую кишку.

Надеть на руку перчатку, увлажнить ее поверхность гелем. Вращательными движениями ввести руку в перчатке в прямую кишку коровы и провести легкий массаж матки. Если хвост не привязан, то перевести его за введенную руку, освобождая пространство для манипуляций с осеменительным инструментом. Нажимая введенной рукой на верхний свод преддверия влагалища, приоткрывать половые губы и, не касаясь их концом инструмента, ввести его на 10-15 см под углом 200 -300, чтобы не попасть в отверстие мочеиспускательного канала. Одновременно указательным и средним пальцем руки стягивая санитарную рубашку с инструмента для искусственного осеменения, и только затем продвинуть инструмент горизонтально до упора в шейку матки. 

Существует три способа фиксации шейки матки в зависимости от ее величины и структуры:
  • кистью руки
  • между указательным и средним пальцами
  • ладонью, прижав шейку матки к лонным костям, если двумя предыдущими способами зафиксировать не удается

Шейку матки нельзя фиксировать в период напряжения стенки прямой кишки, т.к. возможно травмирование слизистой оболочки или прокол стенки влагалища.

Зафиксировать рукой шейку матки, продвинуть ее несколько вперед, расправляя складки во влагалище, перевести инструмент в горизонтальное положение и также продвинуть его вперед.

Убедившись, что корова готова к осеменению, ректально фиксировать шейку матки указательным и средним пальцем, а большим пальцем нащупать отверстие ее канала и ввести в него конец пипетки.

или

Фиксировать влагалищную часть шейки матки всей кистью руки, пипетку ввести под контролем мизинца.

или

Шейку матки пальцами прижать ко дну костного таза и под контролем ладони ввести пипетку в отверстие шейки матки.


После введения пипетки в отверстие цервикального канала, шейку матки захватить кистью руки и осторожно вращая пипетку в разные стороны, продвинуть ее в шейку матки, в первую ее треть на 6-8 см и медленным давлением на поршень ввести семя. Пипетку осторожно извлечь из влагалища, а руку из прямой кишки. Пипетку и перчатку после осеменения уничтожить

Маноцервикальный способ

При маноцервикальном методе искусственного осеменения сперма вводится в шейку матки рукой через влагалище при помощи стерильного инструмента.

Надеть полиэтиленовую перчатку, смочить ее 0,9 % раствором хлорида натрия (физиологический раствор) или 1% раствором бикарбоната натрия (содовым раствором).

Осторожно ввести руки во влагалище коровы и определить степень раскрытия шейки матки, сделать массаж шейки матки.

Вынув наполовину кисть руки из влагалища, вложить в нее другой рукой подготовленный инструмент для осеменения, ввести кисть руки до шейки матки и под контролем указательного пальца продвинуть катетер в канал шейки матки на глубину 1,5-2 см.

Массируя шейку матки кончиками пальцев, инструмент подталкивают ладонью до тех пор, пока катетер полностью (на 6-7 см) не войдет в канал шейки матки.

Приподнять инструмент на 2-3 см вверх и выдавить из нее сперму большим и указательным пальцем.

После полного введения семени инструмент положить на дно влагалища и помассировать шейку матки в течение 1-2 минут.

Извлечь руку с инструментом из влагалища и утилизировать одноразовый инструмент.

Растворы, используемые для искусственного осеменения.

Для орошения перчатки при маноцервикальном способе применяют раствор хлорида натрия или бикарбоната натрия (содовый раствор). Растворы готовят ежедневно.

На 100 мл дистиллированной воды (кипяченной) 0,9 гр хлорида натрия –р-р хлорида натрия.

На 100 мл дистиллированной воды (кипяченной) 1 гр. бикарбоната натрия (пищевая сода) –р-р бикарбоната натрия (содовый раствор).

Приготовленные растворы подогревают до 90-950С . Хранят растворы в стерильных флаконах.

70 % раствор спирта готовят путем добавления к 73 мл 96 % спирта- ректификата 27 мл дистиллированной воды. Концентрация раствора проверяется спиртометром.

Раствор фурацилина, используемый для обработки наружных половых органов перед искусственным осеменением: в 1 л кипящей воды растворяют 10 гр хлорида натрия и 0,2 гр. фурацилина, р-р охлаждают и фильтруют. Хранится раствор не более 2 дней в бутылке из темного стекла или в затемненном месте.   

Приборы и инструменты на пункте по искусственному осеменению животных.
  1. Сосуд Дьюара
  2. Микроскоп с обогревательным столиком.
  3. Термостат (водяная баня)
  4. Ножницы прямые и изогнутые.
  5. Пинцет
  6. Подставка для инструментов.
  7. Термометр спиртовой.
  8. Термометр комнатный.
  9. Стекла предметные и покровные.
  10. Баночки стеклянные с притертой пробкой (для стерильных марлевых салфеток, спиртовых тампонов)
  11. Тампонница.
  12. Стерилизатор для инструментов.
  13. Шкаф стеклянный для инструментов (шкаф-витрина для хранения инструментов)
  14. Стол
  15. Умывальник, полотенце, мыло, щетка для рук.
  16. Фурацилин в таблетках
  17. Спирт
  18. Натрий хлористый
  19. Бикарбонат натрия (пищевая сода)
  20. Вата (для тампонов)
  21. Стерильные бинты или марля для салфеток.
  22. Мыло хозяйственное.
  23. Спецодежда
  24. Перчатки для и. о.
  25. Комплект инструментов для искусственного осеменения.
  26. Журнал искусственного осеменения, дневник, журнал прихода и расхода семени.
  27. Инструкция по искусственному осеменению.

На пункте по искусственному осеменению должен быть «уголок осеменатора».

При входе на пункт необходим дезковрик.

Температура на пункте по и. о. должна быть не ниже +18 градусов Цельсия